引言

磷酸氯喹作为经典4-氨基喹啉类抗疟药物，凭借其起效迅速、疗效确切、价格低廉等优势，在敏感疟原虫感染治疗中发挥重要作用，近年来还被发现具有免疫调节、抗炎等药理活性。对于磷酸氯喹注射液而言，主成分含量准确性直接影响临床用药安全。目前《中国药典》2025年版规定的非水滴定法操作复杂、检测周期长，难以满足生产过程中间产品快速检测需求。本研究采用紫外分光光度法，在343±2nm波长处通过外标法测定含量，系统考察方法的专属性、线性、精密度和准确度。该方法操作简便、检测快速，为磷酸氯喹注射液质量控制提供了高效、经济的分析手段。

1研究背景

疟疾作为一种由疟原虫感染引起的寄生虫传染病，在全球热带和亚热带地区广泛传播，对人类生命健康产生严重威胁。青蒿素类药物（如青蒿琥酯、蒿甲醚），对恶性疟原虫的杀灭速度较迅速，但磷酸氯喹对间日疟、卵形疟等非恶性疟原虫感染的起效更为迅速且疗效稳定。临床数据显示，磷酸氯喹治疗敏感株疟疾时，患者通常在用药后24-48小时内即可出现发热消退、寒战缓解等症状改善迹象，而部分抗疟药（如氯胍）因需在体内转化为活性代谢产物才能发挥作用，起效时间常延迟至72小时以上，易导致错失治疗疾病的最佳时机。众所周知，几乎所有抗疟药均存在一些不良反应。例如，奎宁易引发金鸡纳反应主要症状为耳鸣、听力减退、恶心呕吐等，不良反应发生率较高。因此，部分患者因无法耐受其不良反应而被迫终止服用该药物；甲氟喹可能会对神经系统造成损伤，常见的神经精神不良反应如焦虑、抑郁、幻觉等，严重时可能会导致精神异常，因其严重的不良反应，导致其在精神疾病患者中的应用受到限制；青蒿素类药物作为老牌抗疟药之一，虽不良反应轻微，但部分患者可能出现一过性转氨酶升高，造成一定程度的肝脏损伤。并且青蒿素类抗疟药物与其他药物的相互作用尚不明确，联合用药时需谨慎评估可能带来的副作用。但磷酸氯喹的不良反应一般发生率较低，且易于控制其不良反应症状。其常见不良反应主要包括轻微胃肠道反应如恶心、呕吐，以及可能会导致头痛、头晕等。上述症状多在用药初期出现，停药后症状可减轻或消失。磷酸氯喹通过与疟原虫DNA结合，干扰其核酸复制与转录过程，同时抑制疟原虫内酸性磷酸酶、胆碱酯酶等关键酶活性，从多个环节阻断疟原虫生长繁殖，这种多靶点作用模式使其不易因疟原虫单一基因突变产生耐药性。在自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎）以及新型冠状病毒肺炎等疾病的辅助治疗中也展现出一定的应用价值。对于磷酸氯喹注射液而言，其主成分磷酸氯喹的含量是否符合质量标准，直接影响临床用药剂量的准确性。因此，建立一种快速、准确、专属性强的含量测定方法，对磷酸氯喹注射液的生产过程控制、成品质量检验以及临床用药安全监测均具有至关重要的意义。目前，《中国药典》2025年版二部中规定磷酸氯喹注射液的含量测定方法为非水滴定法。该方法虽然具有准确度较高的优点，但操作过程较为复杂。且测量过程中，检测周期较长。紫外分光光度法是具有操作简便、检测速度快、成本较低等优点，且通过合理的方法学验证后，可达到较高的准确度和精密度。并且在抗疟药物含量测定领域，已有研究将紫外分光光度法应用于青蒿素、奎宁等药物制剂的质量控制的先例，均取得了良好的检测效果，为该方法应用于磷酸氯喹注射液含量测定提供了实践参考。本研究旨在建立紫外分光光度法测定磷酸氯喹注射液中磷酸氯喹的含量，为磷酸氯喹注射液的质量控制提供一种更高效、便捷、经济的分析手段。

2 仪器与试剂、试药

岛津紫外分光光度计（型号：UV-2700型，来源：日本岛津仪器有限公司）、岛津UV-2600型紫外分光光度计（型号：UV-2600型，来源：日本岛津仪器有限公司）、Sartorius SQP型天平（型号：SQP型，来源：德国赛多利斯有限公司）；盐酸（批号：20221202，来源：国药集团）、磷酸氯喹注射液（批号：250430，规格：5ml/322mg，来源：自制）、磷酸氯喹对照品（批号100421-201802，来源：中国药品检定研究院）、活性炭（批号：24121201，来源：南平元力活性炭有限公司）。

3 实验过程

3.1 溶液配置

3.1.1 稀释剂

精密量取9ml市售盐酸，缓慢加入至1000ml水中，混匀即得。

3.1.2 对照品溶液

精密称取对照品约26mg，置200ml量瓶中，加稀释剂稀释定容摇匀，得到对照品储备液。再精密量取对照品储备液2ml置20ml量瓶中，加稀释剂稀释定容摇匀即得。

3.1.3供试品溶液

精密量取本品2ml置200ml量瓶中，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释定容后，得供试品储备液。精密量取供试品储备液2ml，置20ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀即得。

3.1.4 空白辅料溶液

称取空白辅料（活性炭）20mg置100ml水中搅拌混匀，用0.45μm滤膜过滤即得。

3.2 验证方法

3.2.1 专属性

取上述稀释剂、空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液于190nm到400nm进行波长扫描。结果发现磷酸氯喹在343nm波长处有最大吸收。且稀释剂及空白辅料溶液对主成分最大吸收无干扰，专属性良好。

3.2.2线性

精密称取磷酸氯喹对照品适量，加稀释剂分别稀释成浓度2.6050μg/ml、10.4198μg/ml、13.0248μg/ml、15.6297μg/ml、26.0495μg/ml的对照品溶液。取上述溶液在343±2nm波长下进行测定。以不同浓度的对照品溶液为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制线性方程。得到线性方程为y=0.0374x+0.0038，r=0.9997。结果表明，磷酸氯喹注射液在2.6050μg/ml~26.0495μg/ml浓度范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系。

3.2.3 精密度

（1）重复性

由一人，按上述3.1.1和3.1.2溶液配置过程配置稀释剂，及对照品溶液。按上述3.1.3供试品溶液配置过程，分别平行配置6份供试品溶液，在343±2nm波长处进行测定，结果见表1。

名称	1	2	3	4	5	6	平均含量/%	RSD/%
含量(%)	100.61	101.20	100.81	101.00	101.39	101.59	101.10	0.36

由表1可知，6份供试品的平均含量为101.10%，RSD为0.36%。根据《中国药典》要求，注射剂含量测定的重复性RSD应≤2.0%，本实验RSD=0.36%，表明方法的重复性良好，同一条件下测定结果稳定可靠。

（2）中间精密度

由另一人，使用不同仪器，按上述3.1.1和3.1.2溶液配置过程配置稀释剂及对照品溶液。按上述3.1.3供试品溶液配置过程，分别平行配置6份供试品溶液，取上述溶液在343±2nm波长处进行测定，结果见表2。

名称	1	2	3	4	5	6	平均含量/%	RSD/%
含量(%)	101.31	101.12	100.92	101.51	101.73	101.70	101.22	0.33

由表2可知，6份供试品的平均含量为101.22%，RSD为0.33%。将重复性试验和中间精密度试验的所有12份供试品含量数据合并计算，总平均含量为101.16%，总RSD为0.35%，均≤2.0%，表明方法的中间精密度良好，不同人员、不同仪器、不同时间对测定结果的影响较小，方法具有较好的稳定性和可靠性。

3.1.8 准确度

精密称取对照品约26mg，置200ml量瓶中，加稀释剂稀释定容得到对照品储备液。再精密量取对照品储备液1.6ml、2ml、2.4ml分别置含处方量空白辅料的20ml量瓶中混匀即得80%、100%、120%浓度的供试品溶液，每个浓度平行制备3份，取上述溶液在343±2nm波长处进行测定，结果见表3。

名称	加入量(μg）	测得量（μg）	回收率（%）	平均回收率（n=9）（%）	RSD(%)
80%	10.06	10.25	101.90%	101.18%	0.63
	10.06	10.17	101.11%
	10.06	10.22	101.64%
100%	12.57	12.72	101.22%
	12.57	12.80	101.85%
	12.57	12.78	101.64%
120%	15.09	15.17	100.59%
	15.09	15.12	100.24%
	15.09	15.15	100.42%

由表3可知，9份加标样品的平均回收率為101.18%，RSD為0.63%。根据《中国药典》2025年版四部对准确度的要求，注射剂含量测定的回收率应在95%~105%之间，RSD应≤2.0%。本实验中平均回收率为101.18%，处于规定范围内，RSD=0.63%，表明方法的准确度良好，能够准确测定磷酸氯喹注射液中主成分的含量。

4讨论

本研究选用紫外分光光度法测定磷酸氯喹注射液的含量，主要是由于磷酸氯喹的结构特性。磷酸氯喹分子中的喹啉环为共轭体系，具有较强的紫外吸收特性，在酸性条件下（0.1mol/L 盐酸溶液）稳定性良好，且最大吸收波长343nm处无明显干扰，为准确测定磷酸氯喹注射液含量提供了理论基础。

药品稳定性是评估药品质量的重要指标之一，在磷酸氯喹注射液的稳定性研究中（如加速稳定性试验、长期稳定性试验），需要定期测定样品中磷酸氯喹的含量，以考察药品在不同储存条件下（如不同温度、湿度、光照条件）的含量变化趋势。后续研究中，应继续考察溶液的稳定性、检测条件的耐用性、并与药典中规定的非水滴定测定法测定结果进行比对，进一步确认方法可行性。溶液稳定性液试验中，分别于0h、4h、8h、12h、24h进行含量测定。各时间段测试结果RSD均≤2.0%，表明溶液在24h内稳定。耐用性试验中可考察341nm、342nm、344nm、345nm相较343nm检测波长下的样品测定结果的RSD≤2.0%，另外，为进一步验证方法的准确性，可将紫外分光光度法与药典规定的滴定分析法测定结果进行比较。两种方法的测定结果的差值应≤±2.0%。

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